载脂蛋白B（ApoB）检查项目_载脂蛋白B（ApoB）检查过程

载脂蛋白B（ApoB）检查过程

(1)浇板:每板用10g/L琼脂糖10ml,沸水浴中融化,混匀,冷至50～55℃时加入apoA Ⅰ抗血清50μl,apoB抗血清8μl(用量视抗血清效价而定),迅速混匀后倒在预置在水平台上的玻璃板上,冷后放在4℃,20min后打孔,孔在板的阴极端,孔径3mm,孔间距至少5mm,孔容量5μl.把板放入电泳槽,用滤纸搭桥. (2)稀释抗原:用0.15mol/L NaCl液将校准血清稀释成1∶100,1∶150,1∶200,1∶300,及1∶400(作校准曲线之用),血清标本按1∶200稀释,放4℃冰箱不得超过3天. (3)加样:在低电流状态(10mA/板)将稀释好的定值血清及标本分别吸取5μl(准确),加入琼脂糖凝胶加样孔内.每板都要做一系列标准. (4)通电:稳流24mA/板,端电压6～8V/cm,以流水冷却使琼脂糖保持15℃,电泳3～4h. (5)脱杂蛋白及制干胶膜:电泳后的琼脂糖板浸泡在0.15mol/L NaCl中30min,将胶膜托置于聚酯薄膜上,用多层滤纸在轻轻加压下吸干胶内水分,然后将滤纸、胶膜与聚酯膜三者一起自然干燥,或用热吹风器吹干,干后胶膜会自然与滤纸及聚酯膜分开. (6)染色:将琼脂糖胶膜平铺浸泡于染色液内20～30min. (7)脱色:用脱色液浸泡已染色的胶膜至火箭峰清晰,背景基本无色.可在水中用两片玻璃纸将胶膜夹住,晾干后可长期保存.也可以用流水浸泡脱色至背景干净.

载脂蛋白B（ApoB）检查过程