孕酮检查过程

孕酮检查过程

(1)标准曲线制作:分别为0,10,20,50,100,200,400pg(复管),60℃水浴压缩空气吹干,加补孕酮11000dpm/20μl吹干,各管加1∶5万0.2ml抗体,4℃恒温过夜,次日加5g/L GPS 0.1ml,2.5g/L DCC 0.5ml,4℃放置10min,3000r/min离心10min吸出上清液0.4ml,加到8ml闪烁液中,混旋1min,避光放4h后用液烁仪测量. 另取四管,各加3H-孕酮11000dpm/20μl,吹干,加1g/L,GPS其中二管作总脉冲(T).另二管作非特异性测定管(BN%),BN%DCC分离法同标准曲线制作. (2)未知样品的检测:孕妇取血浆0.05ml或0.1ml,未孕妇或男性取0.2ml,于具塞试管中用重蒸馏水补足剂0.5ml,加0.1mol/L NaOH0.2ml,重蒸二氯甲烷5ml,抽提5min,静置,弃去上层液,二氯甲烷用蒸馏水洗2次,每次1ml,清洗,1500r/min离心3min,吸取二氯甲烷抽提液双份1ml,置45℃水浴蒸干,加3H-孕酮11000dpm/10μl,吹干,加1∶5万抗体0.2ml,以下操作与标准曲线相同.

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